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南通疊泰實(shí)驗(yàn)儀器有限公司
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使用此獨(dú)特的轉(zhuǎn)子非常有必要。341 650g (Optima L-90K超速離心機(jī))，18C離心至少8h?？蛇^夜離心。
1. 從轉(zhuǎn)子上小心拿開離心管，注意不要破壞梯度。用23G針頭在離心管頂部穿孔。用長波紫外線，用一個(gè)斜面向上的18G針頭小心移除發(fā)光的DNA條帶。通常會(huì)有兩條帶。選擇底部的條帶。
上面的條帶是降解的DNA,而底下的條帶是完整的環(huán)狀BACDNA。被移除的條帶的體積大約為200uL。不要取液超過200uL，不然你將得到-部分頂部降解的條帶。轉(zhuǎn)移DNA到一個(gè)15mL的Falcon管，用1XTE緩沖液補(bǔ)足總體積到2mL。
2.加入等體積的NaCl飽和丁醇到DNA溶液中，輕輕混合。靜置混合物30s，使其分離。移除并丟棄上層。抽提溶液4~5次，直到不再有粉紅色。
3.轉(zhuǎn)移DNA溶液到一個(gè)30mL圓底離心管中，加入1lmL dH2O到溶液中，接著加入2.5~3.0體積的100%乙醇。混合并在- 20'C溫育30min。16 417g, 4'C 離心溶液30min以沉淀DNA (J-25I Beckman Avanti 離心機(jī)，JA-25.50 轉(zhuǎn)子)。
4.倒掉乙醇，重懸DNA于0.5 mL的0.3 mol/L乙酸鈉中。轉(zhuǎn)移溶液到一個(gè)1.5mL微量離心管中，加入1mL 100%乙醇。用微型離心機(jī)，20 617g, 4'C 離心溶液30min。
▲因?yàn)锽AC DNA對剪切力敏感，應(yīng)該使用帶有寬孔吸頭的移液器來轉(zhuǎn)移DNA。
